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　　本生闡述：操作步驟三組織切片染色

　　1、Giemsa工作液的配制： 按試劑(A): 試劑(B) =1:9配制Giemsa stain工作液，即取1份的Giemsa stain儲(chǔ)存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中，充分混勻，即為Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。

　　2、新鮮組織立即置于Regaud固定液固定2天，期間應(yīng)更換1次固定液。

　　3、3%的重鉻酸鉀固定1天。

　　4、流水沖洗16個(gè)小時(shí)或過(guò)夜。

　　5、按照常規(guī)脫水、包埋。

　　6、切片，厚度約為5μm。

　　7、常規(guī)脫蠟至水。

　　8、蒸餾水清洗2次，每次約1min。

　　9、置于含有Giemsa stain工作液的染缸內(nèi)，浸染18～24h。

　　10、蒸餾水稍微清洗。

　　11、0.1～0.5%的乙酸洗1～2min。

　　12、自來(lái)水稍沖洗。

　　13、用無(wú)水乙醇迅速脫水3次，每次5～10s。

　　14、二甲苯透明。

　　15、中性樹脂封固。

　　染色結(jié)果：

　　細(xì)胞核藍(lán)色至紫色

　　細(xì)胞質(zhì)淡藍(lán)色

　　嗜鉻細(xì)胞胞質(zhì)黃綠色

　　結(jié)締組織淡紅色

　　注意事項(xiàng)：

　　1、 血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻，以免影響染色結(jié)果。

　　2、 涂片染色中Giemsa染色后，請(qǐng)勿先去除染液或直接對(duì)涂片用力沖洗。

　　3、 如果染色過(guò)深或過(guò)淺，應(yīng)調(diào)整染色時(shí)間或工作液的濃度。

　　4、 Giemsa涂片染色和組織切片染色中，pH值對(duì)染色有一定影響，載玻片應(yīng)清潔無(wú)酸 堿污染以免影響染色結(jié)果。

　　5、染色液在稀釋后液面應(yīng)有金屬光澤，表示染液有染色作用，否則染色液可能失效。 6、 Giemsa組織切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%的乙酸急速?zèng)_洗，避免浮面 沉淀 物污染切片后難以洗脫。

　　7、0.1～0.5%的冰乙酸分化，常用于Giemsa組織切片染色，如有必要亦可用于細(xì)胞涂片，但其濃度應(yīng)適量下調(diào)。0.5%的冰乙酸分化切片時(shí)，切片呈粉紅色即可終止。

　　8、Giemsa組織切片染色中，無(wú)水乙醇脫水要迅速，否則切片易褪色。

　　9、Giemsa涂片染色和組織切片染色中，如需急速獲得結(jié)果，可以按Giemsa stain儲(chǔ)存液：磷酸鹽緩沖液(1×) =1：1配制，即取吉姆薩儲(chǔ)存液(10×)1份、磷酸鹽緩沖液(1×)1份，充分混勻，即為快速吉姆薩染色工作液，將染色液滴加于細(xì)胞涂片或組織切片上，加熱染色，20～30s后重新加染色液，反復(fù)5～10次，其余步驟同上。

　　10、染色液可重復(fù)使用，但不能多次重復(fù)，若有沉淀物應(yīng)過(guò)濾后使用。

　　11、Regaud固定液：按3%重鉻酸鉀水溶液：甲醛=4:1配制，臨用前混勻，1～2天后失效。

　　12、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 13、使用場(chǎng)所應(yīng)通風(fēng)，并遠(yuǎn)離火源。

　　有效期： 24個(gè)月有效甲基綠。

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